1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試材料

白喉烏頭。

1.1.2供試試劑

烏頭堿對(duì)照品；無(wú)水乙醇；氨水。

1.1.3供試儀器

電子天平；Ｃ型玻璃儀；循環(huán)水真空；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；UV-1500PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美析儀器有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；調(diào)溫電熱套；電腦智能溫控低溫超聲波合成萃取儀。

其它儀器：燒杯（5、10、50mL）、容量瓶（10、25、50mL）、移液管（2mL、1mL）、吸耳球、漏斗、濾紙、量筒、吸量管、移液槍。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密稱(chēng)取烏頭堿對(duì)照品0.0109mg，以無(wú)水乙醇水溶液為溶劑，于50mL容量瓶中配置成0.002mg·L^－1的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃的冰箱中保存。

1.2.2樣品測(cè)試液的提取

精密稱(chēng)取白喉烏頭粉碎的樣品粗粉5g置于50mL錐形瓶中，加入0.50mL氨試液，潤(rùn)洗。再加35.0mL無(wú)水乙醇，超聲波提取3次，每次提取0.5ｈ。將提取物用濾紙過(guò)濾，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇洗3～4次，保留濾液，再過(guò)濾3～4次，然后合并濾液。通過(guò)水浴使溶劑揮發(fā)至無(wú)氨味。精密吸取該溶液于50mL容量瓶中，再用乙醇稀釋至刻度，搖勻，配制成供試溶液。按照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制方法測(cè)定一階導(dǎo)數(shù)紫外光譜，計(jì)算總生物堿的含量，每批樣品重復(fù)6次。

1.2.3最大吸收定波長(zhǎng)的選擇

吸取2mL濾液至10mL容量瓶中，加入乙醇稀釋至刻度。取適量的該溶液至比色皿中，用可見(jiàn)分光光度計(jì)，在200～400ｎm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定吸光度，最后確定烏頭堿對(duì)照品的最大吸收波長(zhǎng)（表1）。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

用移液管分別移取0.002mg·L^－1烏頭堿對(duì)照品溶液2、4、6、8、10mL于10mL的容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，放置10min，以空白的無(wú)水乙醇溶液為參比，在最大吸收波長(zhǎng)231ｎm處用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度。

1.3項(xiàng)目測(cè)定（樣品總生物堿的含量測(cè)定）

精密吸取4份1.00mL白喉烏頭樣品溶液，置于25.00mL容量瓶中，各加入無(wú)水乙醇至10.00mL。各加入5％亞硝酸鈉溶液0.28mL，搖均，放置6min；加10％硝酸鋁溶液0.28mL，搖均，放置6min；加4％氫氧化鈉溶液2.00mL，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖均，放置15min。以無(wú)水乙醇為對(duì)照，采用分光光度法在507ｎm處測(cè)定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算所取樣品溶液中總生物堿含量。根據(jù)吸光度的值計(jì)算溶劑中總生物堿的濃度。

總生物堿提取率（％）＝提取液濃度（mg·L^－1）×稀釋倍數(shù)×體積（mL）／稱(chēng)取樣品（g）×100。

方法來(lái)源：[1]阿不力米提·玉麥爾,庫(kù)爾班江·巴拉提.紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定白喉烏頭中總生物堿的含量[J].北方園藝,2022,(12):94-98.