引言

肉蓯蓉配方茶是以肉蓯蓉、淫羊藿、刺五加、紅棗和正山小種為原料制成的具有抗疲勞效果的保健食品。研究表明，肉蓯蓉配方茶原料中含有較多潛在的抗疲勞成分，如肉蓯蓉、淫羊藿、紅茶中的多糖類、皂苷類、多酚類和黃酮類物質(zhì)，可通過調(diào)節(jié)代謝、抗氧化作用、神經(jīng)保護(hù)等方式延緩?fù)庵芗爸袠衅?、減少自由基過度積累而起到抗疲勞作用[1-4]。因此，明確肉蓯蓉配方茶中黃酮類、皂苷類、多糖類和多酚類的含量，對于確定發(fā)揮抗疲勞作用的主成分，進(jìn)而對產(chǎn)品進(jìn)行精準(zhǔn)質(zhì)量控制，以及進(jìn)一步研究可能的抗疲勞機(jī)制具有十分重要的意義。本研究采用紫外分光光度法對肉蓯蓉配方茶中總黃酮、總多酚、總多糖和總皂苷的含量進(jìn)行測定與分析，為產(chǎn)品質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為配方茶的相關(guān)研究提供參考。

1　材料與方法

1.1　材料與試劑

肉蓯蓉配方茶。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品、D-無水葡萄糖、紫丁香苷；濃硫酸（分析純），；高氯酸（分析純）；甲醇、乙醇、乙醚、冰乙酸和苯酚（分析純）；福林酚；亞硝酸鈉、香草醛、氫氧化鈉和碳酸鈉；硝酸鋁。

1.2　儀器與設(shè)備

UV-1900型紫外可見分光光度計(jì)（上海美析儀器有限公司）、分析天平、電熱恒溫水浴鍋、數(shù)控超聲波清洗器、低溫高速離心機(jī)和旋蒸蒸發(fā)儀。

1.3　對照品溶液的制備

1.3.1　蘆丁溶液制備

精密稱取蘆丁對照品0.1000g，置于100mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，超聲溶解，得1mg·mL-1的蘆丁貯備液。精密移取1mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液10mL置于50mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，得200μg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液（總黃酮對照品溶液），以備顯色。

1.3.2　沒食子酸溶液制備

精密稱取0.0093g沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品置于100mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得93μg·mL-1的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密移取5mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液置于25mL容量瓶中，蒸餾水定容至刻度，得18.6μg·mL-1的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液（總多酚對照品溶液），以備顯色。

1.3.3　D-葡萄糖溶液制備

精密稱取D-無水葡萄糖對照品0.01025g，加水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，得102.5μg·mL-1的D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液（總多糖對照品溶液），以備顯色。

1.3.4　紫丁香苷溶液制備

精密稱取紫丁香苷對照品0.01005g，加甲醇溶解并定容至10mL棕色容量瓶中，得1005μg·mL-1的紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液（總皂苷對照品溶液），以備顯色。

1.4　供試品溶液的制備

1.4.1　總黃酮及總多酚樣品溶液制備

精密稱取肉蓯蓉配方茶約0.25g，每批次3份，共9份，置于50mL容量瓶中，加入20mL70%乙醇超聲20min，移取上清液置于100mL容量瓶中，重復(fù)超聲5次，合并上清液冷卻后，用70%乙醇定容至刻度，即得供試品溶液，以備顯色。

1.4.2　總多糖樣品溶液制備

精密稱取肉蓯蓉配方茶約1.0g，每批次3份，共9份，分別置于100mL圓底燒瓶中，加蒸餾水15mL，100℃回流提取1h，放至室溫，用脫脂棉過濾到離心管中，并加入無水乙醇至溶液乙醇體積分?jǐn)?shù)為65%，搖勻，置于4℃冰箱靜置過夜（12h）。第2天，對提取溶液3000r·min-1離心10min，棄去上清液，加入5mL的65%乙醇溶液洗滌沉淀，以上操作重復(fù)3次，離心后留下的沉淀物加水使其溶解并定容到100mL容量瓶中，即得實(shí)驗(yàn)樣品溶液，以備顯色。

1.4.3　總皂苷樣品溶液制備

精密稱取肉蓯蓉配方茶約1.0g，每批次3份，共9份，分別置于100mL圓底燒瓶中，加入50mL75%乙醇在80℃下回流提取2次，每次1h。冷卻后在5000r·min-1下離心10min，合并提取液，將離心上清液收集后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至干，濃縮物加蒸餾水定容至100mL容量瓶中。取1mL上清液，移入裝有D101大孔吸附樹脂的層析柱（10mL注射器當(dāng)作層析柱，填料填到6cm左右），用25mL水洗柱，棄去洗脫液，用25mL70%乙醇洗脫，收集洗脫液轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，用60℃水浴蒸發(fā)至干。蒸發(fā)皿中的蒸干物，用5mL甲醇溶解，用0.45μm濾膜過濾即得樣品液。取1mL轉(zhuǎn)移至具塞試管，在70℃下水浴蒸干，以備顯色。

1.5　顯色方法

1.5.1　總黃酮樣品和蘆丁對照品溶液的顯色

總黃酮樣品與蘆丁對照品溶液中分別加入5%亞硝酸鈉0.4mL，靜置5min，加入10%硝酸鋁0.4mL，靜置5min，后加入4%氫氧化鈉4mL，加蒸餾水定容至10mL，搖勻，靜置15min，即顯色完成。

1.5.2　總多酚樣品和沒食子酸對照品溶液的顯色

總多酚樣品與沒食子酸對照品溶液中分別加入0.5mL福林酚溶液，加蒸餾水至6mL，搖勻后加1.5mL10%碳酸鈉，蒸餾水定容至10mL。75℃下水浴加熱10min，避光放涼，即顯色完成。

1.5.3　總多糖樣品和D-葡萄糖對照品溶液的顯色

總多糖樣品與D-葡萄糖對照品溶液中分別加入5%苯酚溶液1mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱15min，再置于冰水浴中冷卻5min，加水定容至10mL，即顯色完成。

1.5.4　總皂苷樣品和紫丁香苷對照品溶液的顯色

總皂苷樣品與紫丁香苷對照品蒸干物中分別加入0.2mL5%香草醛-冰乙酸溶液，使殘?jiān)芙?，再加?span>0.8mL高氯酸，混勻后移入試管中，蓋緊蓋子在60℃水浴加熱20min，取出，冰浴冷卻5min后，準(zhǔn)確加入5mL冰乙酸，搖勻，即顯色完成。

1.6　標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

（1）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。精密移取200μg·mL-1的蘆丁對照品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL和3.0mL置于10mL容量瓶中，按1.5.1顯色。以隨行試劑作空白對照，在510nm波長處測定吸光度，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)X，吸光度為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性擬合。

（2）沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。精密移取18.6μg·mL-1的沒食子酸對照品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL和2.5mL置于10mL容量瓶中，按1.5.2顯色。以隨行試劑作空白對照，在760nm處測定吸光度，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)X、吸光度為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性擬合。

（3）D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。精密移取102.5μg·mL-1的D-葡萄糖對照品溶液0.5mL、0.8mL、1.1mL、1.4mL、1.7mL和2.0mL置于10mL容量瓶中，按1.5.3顯色。以隨行試劑作空白對照，在波長490nm處測定吸光度，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)X、吸光度為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性擬合。

（4）紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。精密移取1005μg·mL-1的紫丁香苷對照品溶液70μL、100μL、130μL、160μL、190μL、220μL和250μL至10mL試管中，70℃下水浴蒸干，蒸干物按1.5.4顯色。以隨行試劑作空白對照，在波長553nm處測定吸光度，以濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)X、吸光度為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性擬合。

1.7　含量測定

1.7.1　總黃酮

精密稱取肉蓯蓉配方茶約0.25g，3批次，每批次3份，共9份，按照1.4.1制備樣品溶液，精密移取各供試品溶液2mL置于10mL容量瓶中；按照1.5.1顯色，在510nm處測定吸光度，按線性回歸方程計(jì)算總黃酮含量。

1.7.2　總多酚

精密稱取肉蓯蓉配方茶約0.25g，3批次，每批次3份，共9份，按照1.4.1制備樣品溶液，精密移取各供試品溶液1mL置于50mL容量瓶中；按照1.5.2顯色，在760nm處測定吸光度，按線性回歸方程計(jì)算總多酚含量。

1.7.3　總多糖

精密稱取肉蓯蓉配方茶約1.0g，3批次，每批次3份，共9份，按照1.4.2制備樣品溶液，精密移取各供試品溶液1mL置15mL具塞試管中，按照1.5.3顯色，加水定容至15mL；以隨性溶液為空白對照溶液，在490nm處測定吸光度，按線性回歸方程計(jì)算總多糖含量。

1.7.4　總皂苷

精密稱取肉蓯蓉配方茶約1.0g，3批次，每批次3份，共9份，按照1.4.3制備樣品溶液，精密移取各供試品溶液各1mL置于15mL試管中，水浴蒸干，按照1.5.4顯色；以隨行試劑作空白對照，在553nm處測定吸光度，按線性方程計(jì)算總皂苷含量。

方法來源：[1]閆洛美,扎克亞古麗·吾加買提,郝娟,等.紫外可見分光光度法測定肉蓯蓉配方茶中總黃酮、總多酚、總多糖及總皂苷的含量[J].食品安全導(dǎo)刊,2024,(24):94-100.DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2024.24.059.